Brucella canis и бруцеллёз

Бруцеллез (ПЦР)

Возбудителем бруцеллеза собак является Brucella canis – маленькая грамотрицательная неспорообразующая коккобацилла. В редких случаях бруцеллез собак могут вызывать Brucella abortus, Brucella melitensis и Brucella suis.

Среди инфекций собак, передаваемых половым путем, бруцеллез имеет наибольшее ветеринарное значение. Brucella canis вызывает бесплодие у кобелей и сук. Скрининговые исследования на наличие инфекции B. canis являются важной частью обследования собак перед использованием в разведении.

Исследование на бруцеллез должно проводиться при абортах, орхите, эпидидимите и бесплодии. Возможно заражение кастрированных сук и сук, которые не были вязаны. Инфекция B. canis также может протекать в форме системной болезни (например, дискоспондилита). Обычно заболевание поражает собак средних и крупных пород с массой тела от 14 до 64 кг, в возрасте от одного года до восьми лет. Передача инфекции B. canis происходит при контакте с биологическими жидкостями больных особей, содержащими достаточное количество бактерий (2 × 10 6 КОЕ), спермой, лохиями, абортированными плодами/плацентой и мочой.

Основными путями передачи являются оральный и назальный, вторичным – половой (через слизистые оболочки). Воздушно-капельный путь передачи особенно актуален в питомниках при скученном содержании собак. Также возможна трансплацентарная и чрескожная передача инфекции. Хотя передача инфекции через предметы ухода возможна при определенных условиях, B. canis неустойчива к действию факторов окружающей среды и быстро инактивируется стандартными дезинфектантами, содержащими четвертичный аммоний, 1%-ым гипохлоритом натрия, 70%-ым этанолом, растворами йода и глутаральдегидом.

Естественными резервуарами B. canis являются представители семейства собачьи. Бруцеллез собак обычно наблюдается в форме вспышек в крупных питомниках, редко — у собак частных владельцев.

Бруцеллы способны прикрепляться и проникать через слизистые оболочки, после чего происходит их деление в регионарных лимфатических узлах. Бактериемия наблюдается в течение 7-30 дней после инфицирования, при этом идет распространение возбудителя в клетки ретикулоэндотелиальной системы, предстательную железу, матку и плаценту. B. canis обладает тропностью к стероид-зависимым тканям репродуктивной системы. Иногда бруцеллы могут выживать и размножаться в моноцитах и макрофагах ретикулоэндотелиальной системы благодаря ингибированию миелопероксидазы бактерицидной системы. На ранних стадиях инфекции полиморфонуклеарные клетки уничтожают B. canis сравнительно малоэффективно. Бруцеллы обнаруживаются в эндоплазматическом ретикулуме трофобластных клеток у инфицированных беременных сук. Гибель плодов при этом происходит в результате тяжелого некротизирующего плацентита, коагулирующего некроза ворсинок хориона и некротизирующего артериита. Бруцеллы обнаруживаются в желудочном содержимом абортированных плодов. Некротизирующий васкулит и гранулематозное воспаление вызывают патологии семенников, придатков семенников и предстательной железы.

Бруцеллез у собак характеризуется тяжелыми осложнениями при низком уровне смертности.

Клинические проявления бруцеллеза обычно слабо выражены и включают пониженную работоспособность, поясничные боли, хромоту, снижение массы тела и летаргию.

Основным признаком бруцеллеза у беременных сук является смерть плодов, которая может наблюдаться на ранних стадиях беременности (20-ый день), при этом происходит резорбция плодов, либо чаще (75% случаев) на более поздних сроках – до 59-го дня, при этом наблюдаются аборты. У сук, у которых произошла гибель плодов на ранних сроках беременности, может быть неверно диагностировано бесплодие, если до этого не проводилось ультразвуковое исследование для подтверждения беременности.

У кобелей при бруцеллезе происходит нарушение процессов созревания, транспорта и хранения сперматозоидов. Часто наблюдаются эпидидимит, орхит и снижение качества спермы. В хронических случаях происходит атрофия семенников и развитие бесплодия. Бруцеллы при этом обнаруживаются в предстательной железе и уретре и периодически выводятся с мочой. В развитии бесплодия играет роль также образование антител к сперме. Через 3-4 месяца после инфицирования может наблюдаться пиоспермия. При хронических инфекциях у собак обоих полов могут отмечаться увеит или эндофтальмит, лимфаденит, спленомегалия или дискоспондилит; в некоторых случаях – дерматит и менингоэнцефалит. Бактериемия может персистировать в течение нескольких лет, и собаки с субклинической формой болезни остаются источниками инфекции длительное время.

Значительное количество бруцелл содержится в выделениях из влагалища в течение 4-6 недель после аборта. У кобелей наивысшая концентрация микроорганизмов в сперме наблюдается через 2-3 месяца после инфицирования, в течение последующих нескольких лет происходит снижение концентрации. В моче бруцеллы могут обнаруживаться на протяжении нескольких месяцев или лет, чаще у кобелей. Также возможно выделение бруцелл с молоком. Иногда в течение 1-5 лет может происходить спонтанное излечение, однако точно установить факт элиминации возбудителя достаточно сложно. Суки, получавшие антимикробные препараты, могут приносить нормальное потомство после множественных абортов, оставаясь при этом источником инфекции.

Диагноз при бруцеллезе собак ставится на основании клинических симптомов, результатов серологического исследования, бактериологического посева образцов крови, мочи и тканей, гистопатологического исследования и ПЦР. Поскольку ни один из методов прижизненной диагностики не обладает 100%-ой чувствительностью, а серологические методы исследования отличаются недостаточной специфичностью, обычно для постановки диагноза необходимо учитывать результаты ряда исследований. При наличии в питомнике нескольких собак с бесплодием необходимо проведение серологического исследования и бактериологического посева образцов крови от как можно большего числа собак для повышения точности диагноза.

ПЦР используется для обнаружения B. canis в сперме собак с отрицательным результатом бактериологического посева; этот метод, вероятно, является одним из наиболее чувствительных при проведении обследования животных, используемых в разведении. Также для проведения ПЦР используются образцы водянистой влаги от собак с эндофтальмитом и аспираты из лимфоузлов. Существуют тест-системы ПЦР, позволяющие дифференцировать виды бруцелл. Для обнаружения B. canis в образцах ткани, мочи, лейкотромбоцитарном слое и ткани межпозвонкового диска от собак с дискоспондилитом используется ПЦР в реальном времени.

Преаналитика:

1.Одной рукой осторожно разводят в стороны половые губы вульвы суки, другой рукой берут стерильный урогенитальный зонд. 2. Зонд вводят строго по дорсальной стенке влагалища (для избежания попадания в ямку клитора) примерно на 5 см. 3. Вращательными движениями провести взятие клеточного материала. 4. Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями «смахнуть» биоматериал в жидкость, зонд утилизировать. 5. Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка. 6. Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного. 7. Заполнить направительный бланк, указав код клиента. 8. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2℃…+8℃ (синий пакет)

Интерпретация результатов: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Единицы измерения: тест качественный. Результат выдается в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

«Обнаружено»:

в анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Brucella canis, инфицирование Brucella canis lato.

«Не обнаружено»:

в анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов ДНК, специфичных для Brucella canis lato, или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.

Бруцеллез (лихорадка мальтийская, средиземноморская, гибралтарская, кипрская, ундулирующая, тифомалярийная, болезнь Банга) – инфекционное заболевание из группы бактериальных зоонозов, возбудителем которого являются микроорганизмы рода Brucella. Патогенными для человека являются В. melitensis, Br. abortus, Br. suis. Инфицирование человека происходит преимущественно алиментарным путем, реже контактным или аэрогенным. Представляет собой системное инфекционно-аллергическое заболевание со склонностью к хроническому рецидивирующему течению с преимущественным поражением опорно-двигательной, нервной и мочеполовой систем организма. В зависимости от клинической картины выделяют острую, подострую, хроническую и резидуальную форму бруцеллеза. Наиболее чувствительным в настоящее время является иммуноферментный анализ (ИФА), который рекомендуют в качестве экспресс-метода при массовых обследованиях.

Синонимы русские

Антитела к бруцеллезу.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Бруцеллез- зоонозная инфекция, характеризующаяся полиорганным поражением и склонностью к хронизации. Значимым патогенетическим компонентом бруцеллеза является аллергическая реактивность. Передача бруцелл происходит в основном пищевым и водным путем, наиболее часто через молоко и мясо зараженных животных. У скотоводов может реализоваться воздушный и контактный путь передачи бруцеллеза. Диагноз устанавливается при выявлении возбудителя в крови, пунктате лимфатического узла или цереброспинальной жидкости.

Заболевание вызывается неподвижными полиморфными грамположительными микроорганизмами рода Brucella. Вид бруцелл, вызывающих инфекцию, оказывает влияние на тяжесть течения, наиболее тяжело протекает бруцеллез, обусловленный заражением Brucella melitensis. Бруцеллы высокоинвазивны, размножаются внутри клеток организма хозяина, но способны сохранять активность и вне клетки. В окружающей среде устойчивы, сохраняются в воде более двух месяцев, три месяца — в сыром мясе (30 дней — в засоленном), около двух месяцев — в брынзе и до четырех — в шерсти животных. Губительно для бруцелл кипячение, нагревание до 60 °С убивает их через 30 минут.

Резервуаром бруцеллеза являются животные, источником заражения для человека преимущественно являются козы, овцы, коровы и свиньи. В некоторых случаях возможна передача от лошадей, верблюдов, некоторых других животных. Выделение возбудителя больными животными происходит с испражнениями (кал, моча), молоком, амниотической жидкостью. Передача инфекции осуществляется преимущественно фекально-оральным механизмом, чаще всего пищевым и водным путем, в некоторых случаях возможна реализация контактно-бытового (при внедрении возбудителя через микротравмы кожи и слизистых оболочек) и аэрогенного (при вдыхании инфицированной пыли) пути.

Значительную эпидемиологическую опасность представляют собой молоко, полученное от больных животных, и молочные продукты (брынза, кумыс, сыры), мясо, изделия из животного сырья (шерсть, кожа). Животные загрязняют испражнениями почву, воду, корм, что также может способствовать заражению человека непищевым путем. Контактно-бытовой и воздушно-пылевой пути реализуются при уходе за животными и обработке животного сырья.

При бруцеллезе у беременных существует вероятность внутриутробной передачи инфекции, кроме того, возможна постнатальная передача при лактации. Люди обладают высокой восприимчивостью к бруцеллезу, после перенесения инфекции в течение 6-9 месяцев сохраняется иммунитет. Повторное инфицирование бруцеллами отмечается в 2-7 % случаев.

Инкубационный период бруцеллеза в среднем составляет 1-4 недели, но при формировании латентного носительства удлиняется до 2-3 месяцев. Острый бруцеллез обычно развивается быстро, у пожилых лиц начало может быть постепенным (в этом случае больные отмечают продромальные явления в виде общего недомогания, бессонницы, разбитости, артралгий и миалгий с постепенным нарастанием интоксикации на протяжении нескольких дней). Температура тела резко поднимается, сильный озноб чередуется с потом, развивается интоксикация, чаще всего умеренная, несмотря на выраженную температурную реакцию.

Хронический бруцеллез протекает волнообразно, с проявлением симптоматики полиорганных поражений. При этом симптомы общей инфекционной интоксикации обычно выражены умеренно, температура редко превышает субфебрильные значения. Промежутки между обострениями заболевания могут продолжаться 1-2 месяца. В случае формирования нового инфекционного очага внутри организма общее состояние ухудшается. Симптоматика хронического бруцеллеза зависит от преимущественного поражения той или иной функциональной системы возбудителем и выраженности аллергического компонента.

Достаточным для подтверждения диагноза является определение антигенов бруцелл и антител к ним в крови пациента при помощи серологических методов. Исследованию подвергается обычно сыворотка крови, но возможно обнаружение антигенов и в спинномозговой жидкости. Положительный результат серологического исследования не менее чем в 3-4 различных тестах, с характерной соответствующей динамикой показателей, является достаточным основанием для подтверждения этиологии заболевания. Начиная с 20-25-го дня болезни и в течение длительного периода (несколько лет) после выздоровления отмечается положительная реакция на кожную пробу Бюрне (подкожное введение бруцеллина).

Серологические методы также могут быть полезны для дифференцировки острой и хронической формы бруцеллеза. С этой целью может выполняться определение отдельных классов иммуноглобулинов.

Для чего используется исследование?

• Для выявления инфекции (острой и хронической).

Когда назначается исследование?

• При симптомах бруцеллеза (остросептической формы): высокая температура 39-40 °С и выше, озноб, потливость, слабость, миалгия, артралгия, артрит;
• при обследовании пациентов с изолированным поражением мочеполовой системы и суставов при наличии в анамнезе указаний на употребление сырого козьего молока, особенно в эндемичных по бруцеллезу районах, и профессиональных особенностей (ветеринары, работники молочной и мясной промышленности);
• при эпидемиологическом обследовании населения и при отборе лиц для вакцинации против бруцеллезной инфекции;
• дифференциальная диагностика с гриппом, брюшным тифом, малярией, инфекционным мононуклеозом, лептоспирозом, лимфогранулематозом, ревматоидным полиартритом.

Что означают результаты?

Референсные значения: антитела не обнаружены.

Коэффициент позитивности (КП):

0,9 – 1,0 – сомнительный результат (серая зона);

> 1,1 – положительный результат (антитела обнаружены).

КП – концентрация специфических антител в единице объема. Чем выше КП пробы, тем выше концентрация антител.

Отрицательный/сомнительный результат:

• отсутствие инфекции;
• слабая иммунная реакция пациента;
• низкий уровень антител.

Положительный результат:

• острая инфекция;
• рецидив заболевания;
• хроническая форма инфекции.

В случае получения сомнительного результата рекомендуется повторить исследование через 10-14 дней. При повторном результате «Сомнительно» результат следует рассматривать как отрицательный.

В случае заражения бактерией Brucella сначала появляются антитела IgM, затем через некоторое время антитела IgG. Диагноз «острый бруцеллез» подтверждается выявлением антител при острой симптоматике заболевания, совместным выявлением антител IgG, IgA, IgM или только IgM. Если было применено лечение, в течение 2-4 месяцев концентрация IgG, как правило, значительно уменьшается.

В случае хронического бруцеллеза особое значение имеют антитела IgG и IgA. Они свидетельствуют также о давно перенесенном заражении.

Наличие IgA, IgG при отсутствии IgM говорит о хронической инфекции или реинфекции бруцеллой.